Mikroskopi af sporer, hyfer, cystidia, trama til identifikation af svampe

Sammensat mikroskop egnet til at studere svampe

Oplysningerne nedenfor er et sammenfattet uddrag fra Pat O'Reillys seneste bog, 'Fascineret af svampe' . For alle detaljer og eksempelsider se vores boghandel, hvor du kan bestille en forfatter-underskrevet kopi online ... (Bogen indeholder også en ordliste over mykologiske udtryk, og vi har en opsummeret version her for at hjælpe begyndere ...)

Mikroskopi og fotomikografi

Når du ikke kan identificere en svamp i marken, kan du medbringe en prøve hjem til yderligere undersøgelse. Det har ingen mening at gøre det, medmindre der er noget, du kan gøre derhjemme, som du ikke kunne gøre i marken. Mikroskopisk undersøgelse er noget, der bedst gøres indendørs, når du har tid nok til at gøre tingene ordentligt. Her er et par tip til valg og brug af et mikroskop til dette formål.

Legetøjsmikroskoper er okay for at se på dyre- og plantestrukturer, men for mykologi har du virkelig brug for et godt mikroskop. Det skyldes, at svampens fine strukturer er meget små - nogle er tæt på grænsen for, hvad der kan løses ved hjælp af lys. Røntgenbølgelængder er meget kortere end lysbølgernes, og så meget mere detaljer kan studeres ved hjælp af røntgenmikroskopi. Men hvis du tror, ​​at et optisk mikroskop er et dyrt værktøj til noget, der for de fleste af os bare er en hobby, skal du ikke engang overveje at omlægge dit hus til et røntgenmikroskop fra bunden.

Sporer af Lactarius azonites
Sporer af Lactarius azonites , set via en olie nedsænkning mikroskop linse

For at undersøge svampesporer, basidier, cystidier, sphaerocyster og andre små træk ved svampe skal du bruge et mikroskop, der er i stand til mindst x 400 forstørrelse. Ideelt set skal du gå til et mikroskop med en maksimal forstørrelse på x 1000, men for at opnå rimeligt klare billeder ved en så høj forstørrelse skal det have en olie nedsænkningslinse.

Dimensioner og udsmykning (spiny vorter, for eksempel - se billede til venstre) af sporer er vigtige identifikationsfunktioner, og så du kan måle dimensionerne på ting, du ser på, har du brug for et okular, der har et mikrometer i øjet eller et andet kalibreringsmidler. Hvis du finder de instruktioner, der følger med mikroskopet, forvirrende (eller hvis du er heldig nok til at hente en brugt handel uden en håndbog), vil nogen i din lokale svampegruppe næsten helt sikkert være villige til at hjælpe dig med at oprette og kalibrere din system.

Mit eget mikroskop er trinokulært, så kameraadapteren kan bruges, selvom jeg kigger gennem okularerne. (Meget af tiden observerer jeg blot det billede, der overføres til min computerskærm.)

Andre 'must-have' mikroskopfunktioner inkluderer:

  1. Justerbar belysning, ofte fra direkte under diaset, og kaldes brightfield-belysning. (For biologiske instrumenter er mørkfeltbelysning også nedenfra, men i en vinkel, der sikrer, at direkte lys ikke kommer ind i målet; det kræver enten en speciel mørkefeltkondensator eller, ved lav forstørrelse, et sort stop indsat i lysstien.)
  2. Betjeningsknapper til at flytte det mekaniske trin, der holder diaset
  3. Grove og fine fokuskontroller

Farvning af kemikalier

Sphaerocyster i stammestrukturen af ​​Russula cyanoxantha, trækulbrænderen
Sphaerocyster i stilkestrukturen af Russula cyanoxantha , en skovsvamp, der almindeligvis er kendt som Charcoal Burner, er ansvarlig for dens sprødhed. Dette billede blev taget via et mikroskop med forstørrelse x600. Stængelmaterialet på diaset blev farvet med Congo Red.

Den fine struktur af sporer og mange af de andre små dele af svampe, som du vil se på under mikroskopet, er næsten fuldstændig gennemsigtige. De kan kun ses tydeligt, når de er blevet plettet. Som en yderligere hjælp til identifikation producerer mange svampe sporer, der skifter farve, når de er i kontakt med visse kemikalier, kaldet reagenser (på grund af reaktionen, når sporer kommer i kontakt med dem). Her er nogle af de kemikalier, pletter og reagenser, der oftest anvendes i mykologisk mikroskopi:

Destilleret vand

(Ja, god gammel H2O!) Hvis du vil se små motiver og se deres naturlige farver, er vand det ideelle fugtighedsmiddel. Vand fra hanen indeholder kemiske tilsætningsstoffer, der kan begrænse et dias levetid, og regnvand er surt og lige så problematisk, men destilleret vand er billigt og let tilgængeligt. Du skal muligvis tilføje en dråbe fotografisk fugtighedsmiddel for at undgå billedforvrængning på grund af små luftbobler, der er fastgjort til sporer eller andet motivmateriale. (Opvaskemiddel fungerer!) Tilføjelse af ca. 10% glycerin vil sikre, at objektglas holder meget længere, før de tørrer ud.

Ammoniak (NH3)

Dette nyttige, men potentielt farlige kemikalie afgiver en ekstremt skarp damp, og flasken skal derfor altid være lukket, undtagen under brug. (Husholdningens ammoniak fra enhver hardware-butik er fint.) Ud over et reagens, der forårsager farveændring i nogle former for svampe, er ammoniak en komponent i visse andre reagenser. Ren ammoniak er en gas ved normal stuetemperatur, og til mykologisk anvendelse er en 10% opløsning i destilleret vand den normale koncentration. Det er stærkt, og hvis det kommer i øjnene, vil det forårsage alvorlig skade.

Jernsulfat (FeSO4)

Mange svampeentusiaster og mykologer bærer i deres feltkit en krystal af jernholdigt sulfat, kendt i det mindste som jernsalte, til at gnide på svampe (især skørblomst) for at kontrollere, om der er en farvereaktion. Gå ikke på bekostning af at købe krystaller af farmaceutisk kvalitet; de ting, der sælges i havecentre som en mosdræber og til at sænke jordens alkalitet er snavs billigt (oops!) og fungerer lige så godt.

Kaliumhydroxid (KOH)

Dette bruges både som monteringsmedium (normalt sammen med et farvemiddel) og som et reagens, enten i marken eller tilbage ved basen. Hatte- eller gælleflader på nogle svampe skifter farve dramatisk, når de kontaktes af KOH; de kan f.eks. blive gule, røde, magenta, oliven eller sorte afhængigt af arten. Så når du laver et mikroskop-dias ved hjælp af KOH, bevares det ikke kun mod henfald, men du kan også fremkalde en diagnostisk farvereaktion, der undertiden kan bidrage så meget til identifikationsprocessen som størrelses- og formdata opnået via mikroskopet.

Melzers reagens

Denne cocktail af kemikalier er vanskelig at få, fordi en af ​​de afgørende komponenter er det potentielt farlige stof klorhydrat (et voldtægtsmedicin). De andre komponenter er nemme at erhverve - jodkrystaller, kaliumiodid og destilleret vand. Jod reagerer med stivelsesholdige stoffer for at producere en intens blå-sort farve, og svampesporer, der indeholder stivelse, betegnes en 'amyloid'. Hvis du tilmelder dig en svampegruppe i Storbritannien, kan du muligvis få Melzer's Reagent via Association of British Fungus Groups (ABFG). Sporer fra svampearter kan gennemgå diagnostiske farveændringer, når de farves med Melzers reagens. Sporer kaldes:

  1. Amyloid, hvis de får en blå-sort farve.
  2. Dextrinoid, hvis de får en rødbrun farve.
  3. Inamyloid (eller negativ), hvis de blot bliver gule eller slet ikke ændrer sig.

Disse udtryk bruges i feltguider, der viser de kemiske testtegn for hver art.

Pletter

Asci af Poronia punctata
Asci af Poronia punctata , neglesvamp

Hovedårsagerne til brugen af ​​pletter, når du laver objektglas, er at:

  1. forbedre kontrasten i et mikroskopisk billede
  2. fremhæve bestemte vævsstrukturer

Ofte bruges pletter sammen med andre kemikalier, der hjælper med at forhindre henfald eller udtørring af emnet.

Eksempler på farvningsmidler inkluderer:

Congo Red

En fremragende almindelig plet til at se på de fine detaljer i hyfestrukturer (se f.eks. Amanita rubescens gill trama-billedet til højre, hvor de markerede dimensioner er i mikron.) Den leveres som pulver og opløses bedst i en 10% ammoniakopløsning.

Safranin

En anden plet, der producerer røde blodlegemer.

Lactophenol bomuldsblå

Dette pletter chitin, hvilket gør strukturer som spore ornamentik vises meget tydeligere end de gør med de fleste andre pletter (inklusive Congo Red).

Et afskedsskud - ja, denne har mere at gøre med at undgå at gå. Ovennævnte kemikalier inkluderer nogle alvorligt ætsende, sure og giftige stoffer, og derfor skal de virkelig opbevares, hvor børn ikke kan få fat i dem. Dampene fra ammoniak kan for eksempel brænde øjnene - faktisk kræver nogle tests kun ammoniakdamp at passere over svampevæv for at påkalde en farveændring.

Trinokulært mikroskop

Et sikkert pengeskab kan redde et liv. Jeg har en boltet på væggen ved siden af ​​bænken, hvor jeg opbevarer mit mikroskop (se billedet ovenfor), og det er ideelt til opbevaring af kemikalier, barberblade, glasrutschebaner osv.

Sporer

Ovenfor: sporer af appelsinskal Svamp Aleuria aurantia

At lave dias

De nemmeste dias at lave er af sporer. (Her vises sporer af Agaricus bisporus , den kommercielle knapsvamp , der altid findes i købmandsforretninger og supermarkeder.) Alt du skal gøre er at placere svampen, den frugtbare side nedad, på et objektglas og vente en time eller to.

I modsætning til når du prøver at lave et dejligt sporprint, behøver du ikke engang at dække alt over, selvom jeg generelt gør det som en påmindelse om, at der er et skarpt stykke glas nedenunder. Fordi du vil være i stand til at se separate sporer i stedet for at bestemme sporenes farve, når de lagres lag på lag, har du ikke brug for et tæt print, og du må derfor ikke lade det være for længe.

Når du har noget sporestøv på objektglasset, skal du tilføje en dråbe befugtningsmiddel (sæbevand vil gøre!) Eller en passende plet, hvis sporer er klare i stedet for farvede, og læg et dækglas ovenpå. Melzers reagens er et godt valg, fordi på samme tid som forbedring af kontrasten, hvis du holder dias op mod lyset, vil du kunne se, om sporene er amyloid, dextrinoid eller inamyloid - hvoraf mere senere ....

Skub - 1

Det er sværere at lave glider fra meget tynde skiver af svampevæv, og du bør forvente flere fejl end succeser. Vanskeligheden er at skabe en rigtig tynd og jævn skive, der indeholder de funktioner, du vil studere. På gællerne hos en agaricoidart kan du måske undersøge basidierne - de (normalt) klubformede hyphale forlængelser, som sterigmata og sporer bæres på.

Når du har afskåret en tynd skive ved hjælp af enten en skarp barberblad eller revet en strimmel af ved hjælp af et par nålepincetter, er processen den samme som for sporeskinner. Placer din prøve på et dias, tilsæt et par dråber plet og derefter et dækglas, og tryk let på for at flade sektionen. Vær forsigtig: de fleste dækglas er lidt mere end en tiendedel af en millimeter i tykkelse, og de bryder meget let. Fjern overskydende pletter ved hjælp af et absorberende væv, og vent derefter et par minutter, indtil pletten har gennemsyret prøven.

Skub - 2

En variation af denne tilgang - ret lettere, men mere af en hit and miss-teknik - er at klemme en ret tynd prøve mellem to dias - med held vil de bits, du er interesseret i, spytte ud ved en af ​​kanterne. Brug pletten som før for at fremhæve disse kantfunktioner.

Når du studerer basidiomyceter under et mikroskop, er du ikke begrænset til sporestørrelse og former. Du kan også undersøge forskellige former for cystidia. Dette er bindestreger, der skiller sig ud fra forskellige overflader. Afhængigt af hvor de forekommer, får de forskellige navne: pleurocystidia forekommer på gælflader, cheilocystidia er dem på gælkanterne, pileocystidia forekommer på hætteoverfladen, og caulocystidia er dem, der findes på svampens stilk. Formerne af cystidia på hvert af disse steder kan være forskellige, og disse forskelle kan hjælpe dig med at, differentiere mellem arter.

Gilletrama af Hygrocybe chlorophana

Fotomikrofotografiet vist ovenfor er af gilletrama fra Hygrocybe chlorophana , Golden Waxcap. Ikke alle vokskapper kan identificeres til artsniveau ved at undersøge makroskopiske tegn. Nogle bestemmes bedst ved at undersøge dem under et mikroskop, mens nogle få har brug for både makroskopisk og mikroskopisk undersøgelse. Når du klemmer et lille stykke gælemateriale (gilletrama) mellem et dias og dækglas, kan du studere vævets struktur. Nogle har vævet hyfer; nogle er regelmæssige (hyfer ligger parallelt med hinanden) og andre er subregulære (et eller andet sted mellem de to). De lange celler af Hygrocybe chlorophana er tydeligt synlige her, hvorimod hyphcellerne fra f.eks. Hygrocybe miniata , Vermillion Waxcap) er meget kortere.

Software til at gøre mikroskopfotografering mindre elendig

Hvis du nogensinde har forsøgt at tage et fotografi af sporer eller andre stykker svampevæv under et mikroskop, ved du, hvor svært det er at få alt i fokus. Du får en del skarp, og resten er sløret. Problemet skyldes den meget begrænsede dybdeskarphed, der er tilgængelig ved høj forstørrelse. Specialist men billig software kan komme dig til undsætning. Du tager flere billeder, der fokuserer på forskellige dybder, i vævsprøven, og softwaren konstruerer et billede ved hjælp af fokuspunkterne på dine forskellige billeder. Måling af svampesporer gøres meget lettere med et program kaldet Mycocam4. Produceret af mykolog Richard Shotbolt, er den tilgængelig som gratis download fra www.shotbolt.com - og den er meget ligetil at bruge.

Mikroskopi er et specialfag og ikke noget, som alle, der er interesserede i svampe, ønsker at blive involveret i. For meget mere information om dette emne findes der specialtekster og for hjælp til valg og opsætning af et mikroskop websteder for pålidelige uafhængige leverandører som Brunel Mikroskoper er et godt udgangspunkt. Det er normalt muligt at arrangere et besøg for at diskutere dine specifikke behov og prøve et par alternativer.

Eksempler

På mange af vores sider med svampearter kan du se eksempler på sporefotografier taget med et mikroskop med et digitalt kamerafastgørelse. Se f.eks. Laccaria bicolor , som har interessante sporepynt; og Cuphophyllus pratensis , som har ellipsoid eller tåreformet til subglobose sporer.


Hvis du har fundet disse oplysninger nyttige, er vi sikre på, at du også finder vores bog Fascineret af svampe af Pat O'Reilly meget nyttig. Forfatter-signerede hardback-kopier til en speciel rabatpris er tilgængelige her ...

Andre naturbøger fra First Nature ...